Question

（一）请回答与“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验有关的问题：

（1）α-淀粉酶的化学本质是_____________。可利用_____________法将其固定在石英砂上。

（2）将一定量的蒸馏水滴入固定化酶柱并接收流出液，加人双缩脲试剂后呈紫色，可能原因是固定化酶柱中________。经进一步适当处理后，控制淀粉溶液以一定流速过柱，控制流速的主要目的是___________。

（3）淀粉溶液经酶柱后的流出液，加人KI-I₂溶液后呈红色，表明淀粉被水解成_____________；若呈淡棕色，可能原因是α-淀粉酶中混杂有_____________酶。

（4）下列因素对酶柱内酶活力影响最小的是_____________。

A.淀粉溶液的温度    B.淀粉溶液的pH   C.固定化酶柱放置时间    D.淀粉溶液的浓度

（二）利用基因工程技术将基因M导入小鼠乳腺细胞，待目的基因成功整合至染色体上后，取出细胞核植入去核卵细胞中形成重组卵细胞，成功培育转基因克隆鼠。请回答：

（1）获取的基因M在_____________酶的作用下与载体DNA结合形成重组DNA，通过将重组DNA分子导入受体细胞步骤处理后，再经_____________获得含有M基因的小鼠细胞。

（2）将重组卵细胞置于一定浓度的C0₂培养箱中培养，C0₂的主要作用是_______________________。培养过程中，重组卵细胞在开始第_________次分裂时，其核DNA完全丢失来源于乳腺细胞的__________，使胚胎细胞开始逐渐表达相关基因调控胚胎的发育。

（3）重组细胞经培养可形成囊胚，取囊胚的_____________经胰蛋白酶处理后可得到分散的胚胎干细胞。下列不属于胚胎干细胞特征的是__________________________。

A.具有发育的全能性   B.具有异倍体核型   C.在特定培养条件下可分裂而不分化  D.可诱导分化成多种细胞

Answer

蛋白质 吸附 含有未被吸附的游离淀粉酶 使淀粉充分水解 糊精 β-淀粉 D 限制性核酸内切酶和DNA连接 筛选 调节pH 三 调节蛋白 内细胞团 B

【解析】【试题分析】

本题第（一）小题考查与“α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”实验有关的相关知识，第（二）小题考查基因工程、动物细胞核移植及克隆、胚胎干细胞的特征等相关知识，需要考生先从题干中获取有效信息，然后根据题意梳理所学知识，对各小题进行分析作答。

（一）（1）α-淀粉酶的化学本质是蛋白质。固定化酶的制作方法包括物理吸附固定化和化学结合固定化，石英砂化学性质稳定，可用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。

（2）蛋白质可与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。将一定量的蒸馏水滴入固定化酶柱并接收流出液，加入双缩脲试剂后呈紫色，说明流出液中含有蛋白质，可能的原因是固定化酶柱中含有未被吸附的游离淀粉酶；固定化酶的作用机理是当底物经过酶柱时，在酶的作用下转变为产物。为了使淀粉充分水解，所以要控制淀粉溶液以一定流速过柱。

（3）KI-I2溶液与淀粉反应呈蓝色，与糊精反应呈红色。淀粉溶液经酶柱后的流出液，加入KI-I2溶液后呈红色，表明淀粉被水解成糊精；淀粉溶液流经固定化酶柱时可被α-淀粉酶水解成糊精，如果α-淀粉酶中混杂有β-淀粉酶，则糊精又可继续被β-淀粉酶水解成麦芽糖，麦芽糖与KI-I2溶液不能反应，会使流出液呈淡棕色。

（4）温度和pH都会影响酶活力，故A、B项不符合题意；酶有它的产生和消亡过程，当酶发挥作用一段时间后，由于钝化作用而使其活性降低，所以固定化酶柱放置时间也会影响酶活力，C项不符合题意；淀粉溶液的浓度对酶活力的影响最小，为了使淀粉充分水解，可通过控制淀粉溶液的流速进行调整，故D项正确。

（二）（1）基因工程中将获取的目的基因与载体DNA结合形成重组DNA用到的工具酶为限制性核酸内切酶和DNA连接；通过将重组DNA分子导入受体细胞步骤处理后，由于外液DNA分子的导入率较低，而且导入到受体细胞的可能是重组DNA分子，也可能是目的基因或载体DNA自身连接物，因此，还需要经过筛选才能获得含有M基因的小鼠细胞。

（2）将重组卵细胞置于一定浓度的C02培养箱中培养，C02的主要作用是维持培养液的pH。培养过程中，重组卵细胞最初分裂时虽然复制了DNA，但基因的转录并未开始，重组卵最初几次分裂基本依靠卵细胞原有的mRNA，同时其核DNA开始丢失来源于乳腺细胞的阻止核基因表达的调节蛋白，在重组卵细胞开始第三次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调控胚胎在代孕母亲子宫中的进一步发育。

（3）重组细胞经培养可形成囊胚，取囊胚的内细胞团经胰蛋白酶处理后可得到分散的胚胎干细胞。胚胎干细胞分化程度低，具有发育全能性，A项正确；在体外培养胚胎干细胞，可以只增殖而不发生分化，C项正确；通过体外诱导分化，可将胚胎干细胞培育出多种细胞，D项正确；胚胎干细胞属于正常的体细胞，不具有异倍体核型，B项错误，即B项不属于胚胎干细胞的特征。