Question

20世纪以来，生物工程迅猛发展，人们应用生物工程技术已获得了多种需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）图中（I）是______________，在构建重组质粒的过程中，保证（I）与质粒具有相同黏性末端的是酶A、酶B中的_______________。

（2）在将（I）导入受体细胞之前需构建基因表达载体（重组质粒），其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够______________。如果（II）受体细胞是大肠杆菌细胞，最常用的转化方法是________________，原理是________________。

（3）（II）、（III）的过程中要对受体细胞进行检测，目的是判断目的基因是否可以稳定维持和表达其遗传性状。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用_______________技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用___________________技术。

（4）写出质粒作为运载体的条件_______________、__________________(两项）。

Answer

目的基因 酶A 表达和发挥作用 Ca离子转化法 使其成为感受态细胞，容易吸收外源DNA 分子杂交 抗原—抗体杂交 一个至多个限制酶切位点 有标记基因

【解析】试题分析：根据图解流程分析可知，酶A为限制酶，识别并切割含目的基因的供体DNA以及质粒，以获得具有相同黏性末端的目的基因（I）和质粒；酶B为DNA连接酶，将切出的目的基因与质粒重新连接形成重组质粒（II）；再将重组质粒导入受体细胞，得到含转基因的细胞，最后经过筛选，获得能稳定遗传并表达的转基因细胞，经体外培养提取所需的转基因表达产物。

（1）根据前面的分析可知，图中（I）是目的基因，在构建重组质粒的过程中，保证（I）与质粒具有相同黏性末端的是酶A——限制酶。

（2）在将目的基因导入受体细胞的关键是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。如果（II）受体细胞是大肠杆菌细胞，最常用的转化方法是钙离子转化法，其原理是利用钙离子处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，容易吸收外源DNA。

（3）对接受目的基因的受体细胞进行检测，目的是判断目的基因是否可以稳定维持和表达其遗传性状。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用分子杂交技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用抗原—抗体杂交技术。

（4）质粒作为运载体的条件：一是它含有一个至多个限制酶切位点；二是含有标记基因；三是能在宿主细胞内稳定保持和复制；四是对宿主细胞没有危害性。