Question

研究人员将乙肝病毒的表面抗原（HBsAg)基因转入番茄幼叶细胞中，获得能产生乙肝疫苗的番茄植株。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增HBsAg基因时，目的基因DNA受热变性后的单链与引物互补序列结合，在_______酶的作用下进行延伸。设计的引物含有ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，用作载体的DNA分子________(填“含有”或“不含有”）ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，理由是________________。

（2）将HBsAg基因导入番茄幼叶细胞最常用的方法是______________，该方法可以使目的基因插入到细胞中______________的DNA上。

（3）可利用植物组织培养技术获得转基因番茄植株，该技术利用的原理是________________。

（4）通过电镜对番茄果实提取物进行观察，发现了HBsAg颗粒，说明目的基因导入受体细胞后_________。用获得的转基因番茄果实饲喂小鼠，如果在小鼠血清中检测到_____________，说明转基因植物疫苗可口服。

Answer

热稳定DNA聚合 含有 供HBsAg基因插入载体DNA中 农杆菌转化法 染色体 具有某种植物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整个体的潜能（植物细胞具有全能性） 可以维持稳定和表达 抗乙肝病毐的抗体

【解析】试题分析：基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）PCR技术扩增目的基因的过程需要热稳定DNA聚合酶的催化；已知设计的引物含有ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，则用作载体的DNA分子也含有ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，以便HBsAg基因插入载体DNA中。

（2）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，通过该方法最终将目的基因插入细胞中的染色体DNA上。

（3）植物组织培养技术的原理是植物细胞的全能性。

（4）HBsAg是目的基因控制合成的，若在转基因番茄体内出现了HBsAg颗粒，说明目的基因导入受体细胞后可以维持稳定并成功表达了。用获得的转基因番茄果实饲喂小鼠，如果在小鼠血清中检测到抗乙肝病毐的抗体，说明HBsAg颗粒（抗原）可以进入小鼠体内，则转基因植物疫苗可口服。