红细胞含有大量的血红蛋白,我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,经处理并离心,收集血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是________。
②以上所述的过程为样品处理,它包括________、________、分离血红蛋白溶液。
(2)收集的血红蛋白溶液可以在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①透析的目的是______________。
②透析过程中需要用到________缓冲液。
(3)通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①凝胶色谱法是根据________分离蛋白质的方法。
②加入SDS可以使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于_______________。
血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。
(1)将实验流程补充完整:A为_____,B为____。凝胶色谱法是根据_______来分离蛋白质的有效方法。
(2)洗涤红细胞的目的是去除____,洗涤次数过少,无法除去____;离心速度过高和时间过长会使____一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是____。释放血红蛋白的过程中起作用的是____。
(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_______。如果红色区带____,说明色谱柱制作成功。
某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中,准备从猪的血液中初步提取血红蛋白,设计的“血红蛋白提取、分离流程图”如下:
实验准备(配制缓冲液血细胞悬液)样品处理(洗涤、破碎、离心等)蛋白质粗分离(透析)纯化、纯度鉴定(凝胶色谱法、电泳等)
请回答下列有关问题:
(1)样品处理中红细胞的洗涤要用________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7.0的缓冲液并充分搅拌,可以破碎红细胞,破碎细胞的原理是________。
(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是________,若要尽快达到理想的透析效果,可以________(写出一种方法)。
(3)电泳利用了待分离样品中各种分子的_________________________等的差异,而产生不同迁移速度,实现各种分子的分离。
(4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳,观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有________种血红蛋白,从分子遗传学的角度作出的解释是_____________________________________。
下列试剂可用于血红蛋白释放的是
①0.9%的生理盐水
②甲苯
③磷酸缓冲液
④蒸馏水
⑤梓檬酸钠
A. ①③
B. ①④
C. ④⑤
D. ②④
将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时,第2层是
A. 甲苯
B. 血红蛋白水溶液
C. 脂溶性物质的沉淀层
D. 其他杂质的沉淀
以下对DNA和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析错误的是
A. 都要用猪血细胞来做实验材料
B. 在DNA的粗提取中可利用DNA在不同浓度盐溶液中的溶解度不同而析出
C. 在实验中都要进行除杂处理以便得到较纯净的DNA或血红蛋白
D. 将析出的DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂沸水浴后呈现蓝色