Question

木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白和其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶，在食品工业上具有较高的潜在应用价值。现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）实验中，接种环使用前后都在酒精灯上灼烧，其目的是______________________________。

（2）取适量体积的样品涂布在富含__________且其为唯一碳源的固体培养基上，置于恒温培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落并进行一系列操作，然后在培养基上用__________法接种培养，进行菌株的__________。最后将得到的菌株接种到__________（填“固体”或“液体”）培养基中富集。

（3）将富集后的菌株接种于固体培养基上，待菌落长出后用0.1%的__________染色1h，再用1mol/LNaCl脱色。菌落周围会出现__________，筛选__________的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

Answer

杀灭所有微生物及其孢子、防止细菌等的污染 半纤维素 平板划线法或稀释涂布平板 分离纯化 液体 刚果红溶液 透明圈 透明圈（直径）大

【解析】试题分析：分解纤维素的微生物的分离实验的原理：①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长；②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）实验中，接种环使用前后都在酒精灯上灼烧，其目的是杀灭所有微生物及其孢子、防止细菌等的污染。

（2）要从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，应该选用以半纤维素为唯一碳源的培养基；进行菌株的分离纯化时，常用的接种方法为平板划线法或稀释涂布平板法；将得到的菌株接种到液体培养基中富集。

（3）在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈；透明圈越大，说明分解能力越强，因此筛选透明圈（直径）大的菌落即为木聚糖酶高产菌株。