Question

以下是有关生物技术实践的几个问题，请回答：

Ⅰ．某年我国某地由于柑橘大实蝇的危害，橘农遭受到了很大的损失，当地政府想尽一切办法帮助橘农尽量减少损失。

有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是______法，橘皮精油的提取之所以不采取水蒸气蒸馏法，是因为水中蒸馏会导致___________________________等问题。

Ⅱ．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

(1)分别配置_____________的培养基和__________的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

(2)分别向A、B培养基接种___________；

(3)把接种后的培养基放在恒温箱中3d～4d；

(4)从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到__________中；

(5)____________________________________________________________。

Answer

压榨 原料焦糊和有效成分水解 无氮源（或不含氮和青霉素） 加青霉素和氮源 混有两种菌的样品 a、b培养基 把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d

【解析】试题分析：本题是对压榨法提取植物芳香油的过程以及微生物的分离与培养的相关知识的考查。橘皮精油的主要成分是柠檬烯。橘皮精油主要贮藏在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生有效成分水解及原料焦糊的问题，故一般采用压榨法。此法适用于含油多的果实，如柑桔、柠檬等。压榨是利用机械力将含水较多的果实及蔬菜或含油多的种子的细胞破坏，从而得到汁液或油液的方法。圆褐固氮菌是自生固氮菌，能够自主固氮，酵母菌不能自主固氮，可利用这一特点，分离圆褐固氮菌和酵母菌，又圆褐固氮菌是原核生物中的细菌，酵母菌是真核生物，可利用青霉素能杀死细菌，对真核细胞生长无影响，来分离圆褐固氮菌和酵母菌。

Ⅰ 从橘皮中提取橘皮精油常用的方法是压榨法，由于橘皮精油用水中蒸馏法会导致原料焦糊和有效成分水解问题，因此橘皮精油的提取一般不采取水蒸气蒸馏法。

Ⅱ（1）根据试题分析可知，圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养基上生长繁殖，而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。因此分别配置无氮源的培养基和加青霉素和氮源的培养基；分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

（2）)分别向A、B培养基接种混有两种菌的样品；

（3）把接种后的培养基放在恒温箱中3d～4d；

（4）从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到a、b培养基中；

（5）把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d。