Question

回答下列（一）（二）小题

（一）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________。

（2）下图为连续划线法示意图，在图中_________（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（3）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1 ~5号比色管的苯酚浓度应分别为_____________。

管号	1	2	3	4	5	6
苯酚浓度（mg/ L）						1

如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_____________（填序号：①5   ②10   ③20）倍后，再进行比色。

（二）回答下列关于遗传信息的传递与表达的问题

为了探究基因在高等动物体内不同发育阶段和不同类型的细胞中表达的持异性，通常以绿色荧光蛋白编码基因（GFP）作为目的基因构建转基因动物．

（1）获得GFP基因的方法一般包括________和___________．

（2）若使用限制酶PstI（识别序列和切割位点如图2A所示）切开GFP，其产生的末端应该为图1中_______________．

（3）已知图2B所示质粒经EcoRI和AatII联合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8kb的单个基因插在质粒的PstI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和AatII联合酶切后，能形成两种DNA片段，其大小应分别为____kb和____kb．

（4）将上述重组质粒导入小鼠受精卵雄性原核中的常规方法是_______________．

（5）经上述受精卵移植发育而成头部发荧光的转基因小鼠中，全身各种组织或细胞均含有的物质是 ____．

①GFP蛋白      ②GFPmRNA        ③GFP基因

A．①          B．①②          C．③            D．①②③

Answer

蛋白胨、苯酚 ③ 增加 凝固剂 稀释涂布 0、0．2、0．4、0．6、0．8 ③ 从基因文库中获取 化学合成 D 1.8 3.2 显微注射 C

【解析】试题分析：本题（一）考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求学生能够识记培养基的成分以及配制方法，掌握微生物分离与纯化的两种方法，能够结合表格数据对实验进行完善，属于考纲中识记、理解层次的考查。本题（二）考查了基因工程的原理及技术。1、基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。2、基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣抗原﹣抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（一）（1）培养基成分中的有机物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚均可以作为碳源。

（2）图2为平板划线法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中③区域更易获得单菌落。

（3）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加凝固剂。以达到富集酚降解菌的目的。若图1平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离。

（4）进行实验时，首先需要设置浓度为0的苯酚作为空白对照组，并且6号试管苯酚浓度为1，由此可见，浓度梯度应该为0.2，即表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8。如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，即残留液中苯酚浓度约为10.5mg/L，与以上6支试管中的浓度相比，需要将残留液稀释20倍后，再进行比色。

（二）（1）GFP基因为目的基因，获得GFP基因的方法一般包括：从从基因文库中获取和人工化学合成。

（2）限制酶PstI的识别序列及切割位点为：，因此用限制酶PstI切开GFP，其产生的末端应该为。故选：D。

（3）已知图2B所示质粒经EcoRI和AatII联合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8kb的单个基因插在质粒的PstI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和AatII联合酶切后，能形成两种DNA片段，其大小应分别为1.0+0.8=1.8kb和3.2kb。

（4）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。

（5）转基因小鼠体内的所有细胞都是由受精卵有丝分裂形成的，因此都含有GFP基因，但由于基因的选择性表达，该基因只在头部细胞中才表达，则只有头部细胞中含有相应的mRNA和蛋白质。故选：C。