Question

纤维素酶的成本是影响乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程:土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。回答下列问题：

（1）最好选择____________环境采集土样。

（2）以下是一种培养基配方：

纤维素粉	NaNO3	Na2HPO4•7H2O	KH2PO4	MgSO4•7H2O	KC1	酵母膏	水解酪素	蒸馏水
5g	1g	1.2g	0.9g	0.5g	0.5g	0.5g	0.5g	定容至1000mL

利用该培养基培养的目的是__________，在该培养基中_____________是唯一碳源。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入__________染液，加入染液的方法有两种:一种先培养微生物，再加入染液进行颜色反应；另一种是在________时加入染液。

（4）将筛选获得的菌液稀释后用__________(方法)接种到鉴别培养基上，然后挑选产生_________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）请设计实验检测纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量的思路:________________________。

Answer

纤维素丰富的土壤 增加样品中纤维素分解菌的浓度 纤维素 刚果红 倒平板 稀释涂布平板法 透明圈大 向定量纤维素分解菌培养液中加入定量纤维素，定时测定葡萄糖产量的变化

【解析】试题分析：以题意中“实验目的（分离土壤中纤维素分解菌）和培养基的配方”等为切入点，结合各问题情境，围绕“微生物的实验室培养、分离与计数”等相关的基础知识展开联想，在此基础上进行分析作答。

(1)纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，因此分离土壤中纤维素分解菌，应选择纤维素丰富的土壤环境采集土样。

(2)该培养基配方中，纤维素是唯一碳源。可见，在该培养基中，只允许能产生纤维素酶的微生物生长，而其他微生物均不能生长，所以利用该培养基培养的目的是增加样品中纤维素分解菌的浓度。

(3)刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入适量的刚果红染液，加入染液的方法有两种:一种先培养微生物，再加入染液进行颜色反应；另一种是在倒平板时加入染液。

(4)将筛选获得的菌液稀释后用稀释涂布平板法接种到鉴别培养基上。培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，则说明纤维素被纤维素酶催化降解，而且降解圈的大小与纤维素酶的量与活性有关，因此在培养基中应挑选产生透明圈大的菌落作为菌种进行扩大培养。

(5)纤维素分解菌产生的纤维素酶可催化纤维素水解为葡萄糖，由此可知，设计实验检测纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量的思路是:向定量纤维素分解菌培养液中加入定量纤维素，定时测定葡萄糖产量的变化。