人血清蛋白（HSA)具有重要的医用价值。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。
(1)如果HSA基因序列未知，可以采用____________的方法获取该目的基因，为了使目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存，通常要先构建_____________后才能导入宿主细胞。
(2)方框中的“？”一般选用的生物是________,为了提高II过程的导入成功率，通常用________处理大肠杆菌。
(3)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性，所以，选择_____途径（填I或II)获取rHSA更有优势。
(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用_____________方法来进行检验。
A.检验HSA基因是否导入
B.检验细胞中是否产生相应的mRNA
C.抗原、抗体杂交
D.检测是否有标记基因
我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白），对应的基因为s基因。请回答：
（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理_________，
并用_________酶使两者结合。将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞。
（2）在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有_________现象，需要定期使用_________酶处理，以便于分瓶培养。
（3）为提髙工程细胞培养的成功率，下列措施中不幸采用的是（_____）
A.取单个细胞进行培养 B.加入胰岛素 C.二氧化碳培养箱 D.加入动物血清
（4）由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是__________________。
某小组欲进行基因工程菌的构建与研究。请回答下列问题：
（1）获取上述高产谷胱甘肽酵母菌（甲）的DNA，经_____酶处理得到DNA片段后建立_____，从中获取目的基因。
（2）将目的基因与质粒构建成_____，将其导入低产硫化氢的酵母菌（乙）后，经培养获取大量酵母菌，再通过分离纯化培养，根据_____
A．标记基因的表达 B．目的基因的导入 C．硫化氢的含量 D．谷胱甘肽的含量
检测筛选出优良酵母菌。以上过程中的分离纯化培养相当于动物细胞_____培养法。
（3）若要培养转基因植物，还需要用到____________技术，培养过程中主要是通过_____________进行调控。
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制性核酸内切酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：
（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶 ______ 分别对 ______ 、 ______ 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为 ______ 、 ______ 种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使I重组DNA中含有 ______ 作为标记基因。
（3）研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
利用未知序列的抗虫基因培育抗害虫的转基因番茄，通常采用________________
A.建立基因文库的方法 B.化学合成方法 C.逆转录法 D.PCR技术
获取抗虫基因，再用相同的限制性核酸内切酶分别作用抗虫基因和Ti质粒，形成________________，然后在DNA连接酶的作用下，形成重组质粒，通过农杆菌导入番茄细胞，进而培育成转基因抗虫番茄。这种利用基因工程和植物克隆技术相结合培育新品种的方法，就是________________技术的应用。
啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：
（1）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入___，发酵生产 转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有 __（A．1 个 B．2 个 C．3个D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为___。该转基因技术实践应用的成功标志是 __。
（2）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与 __融合，得到___，并促使其在体外分裂发育成 __，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是 __。
（3）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为 __，其作用是 __。
