Question

某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是___________________________。

(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有________和__________。分离纯化时应挑选出________的菌落作为候选菌。

(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。

Answer

无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸(或酸) 具有透明圈 甘油

【解析】试题分析：泡菜制作主要利用了乳酸菌的作用，由于泡菜滤液中含有较多的乳酸菌，直接涂布很难获得单菌落，因此涂布前应进行梯度稀释。微生物的长期保存，常采用甘油管藏的方法。

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。

(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。

(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，装入1 mL甘油后灭菌。将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。