Question

（一）生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。请回答下列问题：

（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样用____________（液体）进行一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用____________涂布到____________培养基表面上，然后将培养皿____________于恒温培养箱，在____________℃条件进行培养。

（2）下图表示利用___________________分离法分离和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是________________。

A.步骤①倒平板操作时，只需要在超净台中不需要在酒精灯火焰旁进行

B.步骤②③使用的工具是接种环，接种前需在明火上烧红后冷却

C.步骤④恒温培养箱培养后的结果说明整个过程中蘸取菌液4次

D.该方法使单菌落更容易分开，但操作复杂些

（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：

（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5〜0. 6mol/L的________（维持较高渗透压）的果胶酶和纤维素酶混合液处理，经过离心纯化后获得__________形原生质体。

（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经胚、心形胚和____________胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出__________苗，切割芽经过生根后形成完整植株。

（3）为了对烟草的某些性状进行改良，可借助__________工程方法，将外源遗传物质（DNA)导入原生质体受体，再对其进行培养获得具有特定性状的再生植株。上述操作属于__________工程技术的操作过程。

Answer

无菌水 玻璃刮刀 LB固体 倒置 37 划线 B 甘露醇 球 球形胚 丛状 基因 植物细胞

【解析】试题分析：本题考查微生物的培养与分离、植物原生质体的培养，考查对微生物培养与分离方法、植物原生质体培养流程及应用的理解和识记。

（一）（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样用无菌水进行一系列的梯度稀释。将稀释后不同的水样分别用玻璃刮刀涂布到LB固体培养基表面上，然后将培养皿倒置于恒温培养箱，在37℃条件进行培养。

（2）据图④可知该实验接种方法为划线分离法。倒平板时，需要在酒精灯火焰旁进行，以避免杂菌污染，A项错误；接种环可通过灼烧灭菌，B项正确；划线接种法整个过程中只蘸取菌液1次，C项错误；该方法与稀释涂布平板法相比，单菌落不容易分开，但操作较为简单，D项错误。

（二）（1）果胶酶和纤维素酶可以去除细胞壁，0.5〜0. 6mol/L的甘露醇溶液为细胞的等渗溶液，获得的原生质体在0.5〜0. 6mol/L的甘露醇溶液中由于表面张力作用呈球形。

（2）胚性细胞经培养形成细胞团，再经两条途径形成再生植株。一是细胞团经球形胚和心形胚、胚状体，最后发育成植株。二是细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出丛状苗，切割芽经过生根后形成完整植株。

（3）将外源遗传物质（DNA)导入原生质体受体，可借助基因工程方法，再对其进行培养获得具有特定性状的再生植株。上述操作属于植物细胞工程技术的操作过程。