Question

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用__________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入下图所示酶的识别序列，这样可以用____________________酶处理两个基因后，得到____________端(填图中字母)相连的融合基因。

(2)将上述融合基因插入右图所示Ti质粒的T－DNA中，构建________________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含______________的固体平板上培养得到单菌落，再利用__________培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是______________________________，进一步筛选后培养获得转基因油菜。

(4)提取上述转基因油菜的mRNA，在____________酶的作用下获得cDNA，再依据________的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完________。

Answer

PCR ClaⅠ(限制酶)和DNA连接 A、D 表达载体(或“重组质粒”) 四环素 液体 利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 逆转录 融合基因 转录

【解析】试题分析：本题以增加油菜种子的含油量为材料背景，考查基因工程的相关知识，关键能够掌握目的基因获取的方法，能够结合图解中限制酶切点选择合成的工具酶获得融合基因，同时掌握目的基因导入受体细胞以及目的基因检测与鉴定的方法等，再结合题意，就能准确解答该题。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞。

（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成转录。