Question

回答下列(一)、(二)小题：

(一)随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究。下图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

(1)获取土壤样品的取样地点最好选在____________________。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源，其原因是________________。

(2)根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是____________法，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液________________。

(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是__________。采用____________方法对其进行灭菌。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是______________________(写出一点即可)。

(二)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)获取外源基因用到的工具酶是___________________。

(2)在过程②中，用____________酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有________性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的______________，在培养过程中应将培养瓶置于___________培养。

(3)若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行____________后进行胚胎移植。

(4)下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是________。

A．图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞

B．重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录

C．将早期胚胎(如早期囊胚)植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位

D．如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链反应扩增该基因

Answer

石油烃污染明显处 只有能利用石油烃的微生物能正常生长繁殖 涂布分离 进行（梯度）稀释 接种环 灼烧 接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始划线 限制性核酸内切酶 胰蛋白酶 异质 动物血清 CO2培养箱 胚胎分割 B

【解析】试题分析：

(一）（1）要获取相应的菌种，应到相应的环境中获取，获取土壤样品的取样地点最好选在石油污染明显处。

（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。
培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。
（3）接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体--菌落。

(二）分析题图：图示是获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图，其中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶；②表示动物细胞培养过程；③表示从成年母绒山羊中获取卵母细胞

解析：

一、（1）要获取相应的菌种，应到相应的环境中获取，获取土壤样品的取样地点最好选在石油污染明显处，为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①一④所用培养基，其成分的特点是只含石油烃一种碳源，从而有利于目的菌的生长，抑制其他微生物的生长。

（2）常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，若发现无法区分菌落，说明稀释度不够，可以将重新进行梯度稀释。
（3）接种的工具为接种环；配置好的培养基进行高压蒸汽灭菌，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始划线 ，均会导致 造成划线无菌落。

二、（1）①表示基因表达载体的构建过程，该过程首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。
（2）②表示动物细胞培养过程，该过程中要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理将皮肤组织块，使之分散成单个成纤维细胞。未经克隆化的细胞系具有异质性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的动物血清，在培养过程中应将培养瓶置于CO2培养箱培养
（3）从重组细胞到早期胚胎需要采用（早期）胚胎培养技术．在胚胎移植前，通过胚胎分割技术可获得较多胚胎

（4）A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞，A正确；

B.重组细胞最初分裂前就有基因的转录，B错误；

C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位，便于早起胚胎的着床，C正确；

D.化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增可用于获取已知序列的目的基因，D正确

点睛：本题的知识点是微生物培养过程中的无菌技术，分离微生物的常用的接种方法和接种工具，主要考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

本题结合图解，考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤；识记动物细胞培养过程；识记胚胎工程的相关技术，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题。