Question

（一)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

(1)无菌操作是微生物实验中重要的一项技术，下列常用的无菌操作中错误的是（_____）

A.用酒精擦拭双手

B.用氯气消毒水源

C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行

D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭

(2)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。

(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即__________和_______。

(4)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力____________。

(二)为了更好地分解石油，通过基因工程产生超级细菌。下图a表示基因工程中经常选用的载体——pBR322质粒,Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因,Tet^r表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检査载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌(受体细胞），将大肠杆菌涂布在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图b的结果(黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：

(1)将重组的DNA分子导人受体细胞时，用________处理大肠杆菌，增大____________。

(2)pBR322质粒的化学本质是_______，其控制着__________等性状。与图c空圏相对应的图b中的菌落表现型是___________，由此说明目的基因插入了_____________中。

(3)基因工程成功的标志是_______________________。

Answer

D 原油 选择 平板划线法 稀释涂布平板法 大 氯化钙 细胞壁的通透性 DNA 抗氨苄青霉素和抗四环素 能抗氨苄青霉素,但不能抗四环素 Tetr 目的基因在受体细胞中表达

【解析】试题分析：微生物接种常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。培养基按用途分为选择培养基和鉴别培养基，要选择出某一特定的菌种，需要提供目的菌生长的必要条件，并抑制或阻止其他微生物的生长，要鉴别某一目的菌，需要用特别的试剂进行检验，通过观察现象来确定。分析题图：a表示质粒，其本质是双链环状DNA分子，其上含有标记基因Amrr、Tetr；b培养基中含有氨苄青霉素，能在b上生存的是能抗氨苄青霉素的大肠杆菌，即含有Amrr；c培养基中含有四环素，能在该培养基上生存的是能抗四环素的大肠杆菌，即含有Tetr。

（一)（1）用酒精擦拭双手属于化学药剂消毒，A正确；用氯气消毒水源属于化学药剂消毒，B正确；实验操作应在酒精灯火焰附近，因为高温防止杂菌污染，C正确；玻璃器皿（吸管、培养皿）等应用干热灭菌，酒精擦拭属于消毒，不能杀灭所有微生物，D错误。

（2）筛选能分解原油的菌种应以原油为唯一碳源的培养基，该培养基属于选择培养基。

（3）纯化菌种常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。

（4）分解圈越大说明利用原油的能力越大，降解能力越强。

（二)（1）将重组的DNA分子导入大肠杆菌细胞时，需要先用氯化钙处理，增大其细胞壁的通透性。

（2）pBR322质粒的化学本质是双链环状DNA分子，其结构上的Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，所以该质粒有抗氨苄青霉素和抗四环素的能力。图b中的菌落能抗氨苄青霉素，图c中的实心圈能抗氨苄青霉素和四环素，所以与图c空圈相对应的图b中的菌落能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，由此说明目的基因插入了四环素抗性基因（Tetr）中。

（3）基因工程成功的标志是目的基因在受体细胞中表达出相关的蛋白质。

【点睛】本题考查微生物的实验室培养、基因工程的有关知识，意在考查考生从题干和题图中获取有效信息的能力；能理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，解决问题和得出正确结论的能力。