Question

（11分）下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。过程②必需的酶是       酶，过程③必需的酶是       酶。

（2）在利用AB获得C的过程中，必须用              切割A和B，使它们产生相同的粘性末端，再加入       ，才可形成C。利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是__              ___。

（3）为使过程⑧更易进行，可用       （药剂）处理D。

（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___       ___。为了检测胰岛素基因请转录的mRNA是否翻译成_____，常用抗原-抗体杂交技术。

（5）如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后通过农杆菌转化作用将目的基因插入植物细胞的______上。

Answer

（11分）（1）平末端 逆转录 解旋

（2）同一种限制性内切酶 DNA连接酶

RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录

（3）CaCl2 （4）DNA分子杂交技术 蛋白质

（5）T－DNA 染色体DNA

【解析】基因工限制酶切末端有粘性末端和平末端，由mRNA获得DNA的途径是逆转录法，在此过程中需乃至 逆转录酶、、真核生物的的基因由编码区和非编码区组成编码区含有内含子(不编码蛋白质)，成熟的信使RNA不含内含子和非编码区所转录的对应的序列。故逆囩成的DNA中无内含子与非编码区；B能与目的基因结合并将目的基因导入大肠杆菌，所以B为运载体，大肠杆菌中的质粒常为运载体，运载体上面的标记基因是为了筛选了导入了目的基因的受体细胞，能将运载体切割的酶是限制性核酸内切酶，将目的基因与运载体相连的是DNA连接酶，将目的基因导入大肠杆菌进，常用 CaCl2 溶液处理大肠杆菌，增加细胞壁的通透性由于基因的选择性表达，胰岛素基因只在胰岛B细胞内表达而不在肝脏内表达，所以在肝脏细胞中不能转录出翻译胰岛素的模板信使RNA。利用DNA杂交技术检测是否导入成功，利用抗原抗体反应检测是否表达，将目的基因导入植物细胞通常用农杆菌转化法，将目的基因与T—DNA结合将目的基因导入到植物细胞核中的染色体上。