Question

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制性核酸内切酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶 ______ 分别对 ______ 、 ______ 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为 ______ 、 ______ 种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使I重组DNA中含有 ______ 作为标记基因。

（3）研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。

Answer

PstI、SmaI 含鱼抗冻蛋白基因的DNA 质粒 4 2 抗氨苄青霉素基因 农杆菌转化

【解析】试题分析：本题考查基因工程的操作程序，考查对基因工程工具的特点、各操作步骤原理的理解。

（1）考虑既不破坏目的基因又能切除目的基因，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶PstI和SmaI分别对含鱼抗冻蛋白基因的DNA 和质粒进行切割，在含鱼抗冻蛋白基因的DNA上共有三个酶切位点，切割后产生的DNA片段有4种，环形质粒上有2个酶切位点，酶切后有2种DNA片段。

（2）质粒中的抗氨苄青霉素基因作为标记基因，可用于筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞。

（3）将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内通常采用农杆菌转化法。