Question

某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：

（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。

（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起________________作用；培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。

A.高压蒸汽 B.干热 C.添加抗生素 D.过滤 E.紫外线照射 F.70﹪酒精浸泡

（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数往往_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。

Answer

脲酶（分解尿素的酶） 氨（NH3） 凝固剂 酚红 D 检测培养基平板灭菌是否合格 4.7×108 低

【解析】（1）分解尿素的微生物含有分解尿素的酶，将尿素分解成氨，所以分离能分解尿素的细菌时，要以尿素作为选择培养基的唯一氮源。

（2）在配置微生物培养的固体培养基时需要加入琼脂作为凝固剂；培养基中添加酚红作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（3）由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。

（4）微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由题意知1ml瘤胃样液中的菌落数是（49+47+45）÷3÷0.1×1000=4.7×105个，所以每升瘤胃样液中的活菌数为4.7×105×103=4.7×108。有些活菌在培养过程中死亡,另外有些菌落是有多个活菌共同形成的,所以按形成的菌落数目来计算活菌数目的话,结果往往会少于活菌实际数目。

【点睛】本题是对微生物实验室培养过程中对实验用品进行灭菌常用的方法及检测培养基灭菌是否彻底的方法、估算样品中菌株数的方法、微生物常用的接种方法和具体操作步骤的综合性考查，回忆微生物实验室培养过程中对实验用品进行灭菌常用的方法及检测培养基灭菌是否彻底的方法、估算样品中菌株数的方法、微生物常用的接种方法和具体操作步骤，然后解答问题。