Question

铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答：

（1）用优良品种自然生长的茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无需使用的是________ (A.乙醇B.无菌水 C.甘露醇 D.次氯酸钠)。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的__________，将其进行__________(处理）后再转入__________培养基中继续培养，直至长成幼苗。这种通过组织培养技术快速繁殖植物的方法，也称为__________。

（2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌作用, 需要大量内生菌进行相关实验。分离内生菌时最好采用_________ (A.G6玻璃砂漏斗过滤法 B.血细胞计数法 C.划线分离法 D.涂布分离法），再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_____________。

（3）研究发现，200mg/L浓度的卡那毒素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中,导入受体细胞的_________分子应同时带有目的基因和________基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚-浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是：石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合生产橙黄色化合物，在490mm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品的石斛多糖含量。这种方法类似于泡菜汁中_____________含量的测定，称之为_____________法。

（5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入___________，以提高铁皮石斛的出汁率。

Answer

C 丛壮苗 分株∕分株培养 生根 植物克隆 D 扩大培养 重组DNA∕重组质粒 卡那霉素抗性∕抗卡那霉素 亚硝酸盐 光电比色 果胶酶∕果胶酶和果胶甲酯酶∕果胶酶和纤维素酶∕果胶酶、果胶甲酯酶和纤维素酶

【解析】试题分析：本题考查植物组织培养、微生物培养、基因工程、植物有限成分的提取，考查对相关技术原理的理解和对操作流程的识记。

（1）给茎消毒时需要使用70%的乙醇、无菌水和5%次氯酸钠，无需使用甘露醇。细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中容易生芽，待长出较多的丛壮苗，将其进行分株∕分株培养后再转入生根培养基中继续培养，直至长成幼苗。这种通过组织培养技术快速繁殖植物的方法也称为植物克隆。

（2）涂布分离法更容易使单菌落分开，分离铁皮石斛的内生菌时最好采用涂布分离法。再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行扩大培养。

（3）导入受体细胞的重组DNA（重组质粒分子）应同时带有目的基因和卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因，抗卡那霉素基因作为标记基因，可以利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）在490mm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，这种方法类似于泡菜汁中亚硝酸盐含量的测定，称之为光电比色法。

（5）细胞的主要成分为纤维素和果胶，植物细胞壁的存在影响细胞成分的提取，高效提取石斛多糖，可在提取液中加入果胶酶（果胶酶和果胶甲酯酶或果胶酶和纤维素酶或果胶酶、果胶甲酯酶和纤维素酶），以提高铁皮石斛的出汁率。