Question

生物乙醇是指通过微生物的发酵将各种生物质转化为燃料酒精。它可以单独或与汽油混含配制成乙醇汽油作为汽车燃料。我国成功利用农作物废弃物—秸秆（主要成分为纤维素）代替粮食作为原料来进行燃料乙醇的工业化生产。其主要技术流程为：秸秆→秸秆颗粒→反应罐水解→过滤除渣→酒精发酵→蒸馏。

（1）将秸秆颗粒装入反应罐进行水解，需加入_______________的微生物，从而能将秸秆中的成分转变成葡萄糖。从土壤中获取该微生物时，首先选择培养，然后通过_______________法直接筛选出该微生物。

（2）若要对筛选获得的菌液进行计数，应将菌液用______________法接种到平板上。如果将1mL菌液稀释100倍，在3个平板上分别加入0.1mL的稀释液，经过培养后，3个平板的菌落分别是93、96、99，据此可得出每升菌液中的活菌数为____________，通常运用该方法统计出的菌落数目______（高于、低于或等于）活菌的实际数目，原因是__________________________________________________。

（3）酒精发酵阶段需接种的微生物是___________，该微生物在_______________的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

Answer

能分解纤维素 刚果红染色 稀释涂布平板 9.6X107 低于 当两个或多个细胞连在一起时，形成和观察到的只是一个菌落 酵母菌 缺氧（无氧）、呈酸性

【解析】试题分析：微生物的分离是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要环节。土壤中的微生物很多，本题中要从土壤中获得分解纤维素的菌。接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。用途：一般多用于从菌种的纯化；稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞)，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。。

（1）秸秆的主要成分是纤维素，所以需加入能分解纤维素的微生物，将秸秆分解为葡萄糖。

（2）微生物的接种方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，后者可以用于计数。根据题干提供的数据进行计算，每升菌液中的活菌数=（93+96+99）÷3÷0.1×1000×100=9.6×107个。由于当两个或多个细胞连在一起时，形成和观察到的只是一个菌落，导致计出的菌落数目低于活菌的实际数目。

（3）酒精发酵需要的微生物是酵母菌，其在缺氧（无氧）、呈酸性的发酵液中可以生长繁殖，而绝大多数其他的微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

【点睛】解答本题的难点是微生物的接种方法，并利用实验提供的数据进行计算。