Question

回答下列有关基因表达和生物工程问题。

(1）基因工程是生物工程核心技术。下列是分子实验室中构建产生胰岛素基因工程菌的部分操作，正确流程是____________。（用题中编号排序）

①筛选含有胰岛素基因的受体细胞   ②胰岛素基因与运载体重组  

③重组DNA导入受体细胞           ④获取胰岛素基因

下图所示为用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因(4kb，lkb=1000个碱基对长度)及其上DNA片段示意图。

(2）片段D为目的基因中的某一片段，有关叙述正确的是_________（多选）。

A.若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子

B.DNA连接酶作用于②处，DNA解旋酶作用于①处

C.若只用片段D中的3个碱基对，则可以排列出4³种片段

D.同一脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间依次经过“一脱氧核糖—磷酸基—脱氧核糖—”连接

下图所示为三种质粒示意图。图中A_P为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。EcoRⅠ(0.7Kb)、PvuⅠ(0.8Kb)等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，是指质粒在受体细胞中复制时的起点。

(3）图中质粒A、质粒C能否作为目的基因运载体最理想的质粒？__________(能/否)。为什么，

请说明理由 __________________________________________________________________.

(4）用EcoRⅠ完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒（EcoRⅠ在目的基因和质粒上的酶切位点如上两图所示)，则进行电泳后观察可出现长度为1.1kb和_____kb,或者分别是_____kb和______kb两个片段。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

Answer

④②③① BD 否 质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制 5.6 3.1 3.6

【解析】【试题分析】

1.基因工程的基本操作程序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。

2. 本题主要是对基因表达载体的构建的相关知识进行综合考查，有一定的难度。需要考生对所学知识进行归纳梳理、把握知识的内在联系，再结合题意，一步一步认真作答，才能顺利解题。

（1）根据基因工程的基本操作程序可推知，构建产生胰岛素基因工程菌的流程是④获取胰岛素基因、②胰岛素基因与运载体重组、③重组DNA导入受体细胞、①筛选含有胰岛素基因的受体细胞。

（2）密码子是由DNA转录形成的信使RNA分子上的三个连续碱基组成的，若图中的ACT能决定一个氨基酸，则其对应的密码子是UGA，A项错误；DNA连接酶作用于②磷酸二酯键处，DNA解旋酶作用于①氢键处，B项正确；若只用片段D中的3个碱基对（碱基对已经确定，而且是三种不同的碱基对），则可以排列出3×2×1＝6种片段，C项错误；结合图示可知，同一脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间依次经过“一脱氧核糖—磷酸基—脱氧核糖—”连接，D项正确。

（3）据图可知，质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制。因此，图中质粒A、质粒C不能作为目的基因运载体最理想的质粒。

（4）据图可知，目的基因中除了有限制酶（PvuⅠ）的切点外，还存在一个限制酶EcoRⅠ的切割位点，可以把目的基因切割成1.0kb和3.0kb两种长度的片段。用EcoRⅠ完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，则进行电泳后观察可出现长度为0.1＋1.0＝1.1kb（质粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因时形成的小片段）和2.7－0.1＋3.0＝5.6kb（质粒切割后形成的大的片段＋切割目的基因时形成的大片段）；如果目的基因反过来插入，则进行电泳后观察可出现长度为0.1＋3.0＝3.1kb（质粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因时形成的大片段）和2.7－0.1＋1.0＝3.6kb（质粒切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的小片段）。