Question

为探究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”，某同学进行了如下实验：请分析回答下列问题：

⑴配制的乳酸菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的______和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是_____________。

⑵接种微生物的方法有很多，图1中过程③所示的方法为________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_________________ 。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示酸奶样品中的乳酸菌的数量(单位：个/ml)，这里的n=_______。

⑶请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1:分别取______________加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到________℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2:向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3:将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

Answer

（1）维生素 调pH

（2）稀释涂布平板法 分别计数3次，取平均值，使实验结果更加准确可靠 6

（3）等量的且适量的青霉素、四环素、无菌水 50（1分） 未接种的培养基

【解析】（1）配制的乳酸菌的培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加人适量的维生素和琼脂。培养基的制作过程是：计算-称量-溶化-灭菌-倒平板。在溶化和灭菌之间要进行调pH的操作。

（2）图1过程①②是梯度稀释，过程③是涂布平板，故过程①②③所示的方法为稀释涂布平板法。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是分别计数3次，取平均值，使实验结果更加准确可靠。由图可知，该样品是10mL，然后经过①过程稀释了100倍，又经过三次②过程继续稀释了三次10倍，总共被稀释了100000倍，故最后计算该样本菌落数后，需要×100000倍×10mL=106，所以 n=6。

（3）由“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”这一实验目的可知，该实验的自变量是青霉素、四环素，所以在无菌培养皿中分别加入等量且适宜的青霉素、四环素和无菌水，其中无菌水这一组是对照组。倒平板的温度是50°C左右。因需要检验培养基灭菌是否彻底，所以需要将一个未接种的培养基和上述的三组培养基同时置于适宜温度下培养。

【考点定位】微生物的分离和培养；某种微生物数量的测定；培养基对微生物的选择利用

【名师点睛】常用的微生物接种方法有两种

a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作（如下图所示）：

涂布平板操作（如下图所示）：