Question

[生物——选修1:生物技术实践]国家标准规定每毫升酸奶产品中乳酸菌菌数不得低于1×10⁶.为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达到国家标准，某兴趣小组进行了如下实验，请回答下列问题：

(1)制备培养基：培养基的碳源为_______（填“含碳无机物”或“含碳有机物”）。检测培养基灭菌是否合格的方法是_____________________。

(2)样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取25mL酸奶样品加入盛有___________mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀。然后进行系列稀释操作，得到稀释至10⁶、10⁷、10⁸倍的样品。

(3)培养与统计：吸取不同稀释度的样品各1mL,分别置于不同培养皿内，加入适宜温度的溶化状态的培养基，使之混合均匀，冷却成平板。每个稀释度做3个重复。在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计，结果如下：

稀释度（倍）	10^6	10^7	10^8
平板	1	2	3	1	2	3	1	2	3
平板菌落数（个）	432	421	445	78	67	74	9	6	8

为了保证结果准确，应选择上述稀释度为________倍的平板菌落数作为统计结果，计算出样品中每毫升乳酸菌数为____________。

(4)测定微生物的数量常采用稀释涂布平板法，其统计的数值往往比实际数目_________,原因是________。

Answer

含碳有机物 取若干灭菌后未接种的培养基（或空白平板）培养一段时间，观察是否有菌落生长 225 107 7.3×109 低 两个或多个细胞连在一起，观察到的只是一个菌落

【解析】【试题分析】

1．不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。

(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。

(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

2.先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25mL加入盛有225mL无菌水的三角瓶，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10∶1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。

3. 用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300，且无较大差异的平板进行计数。并且用其平均值作为估算的最终结果。

（1）乳酸菌是异养型生物，所以培养乳酸菌的培养基应用含碳有机物作为碳源；检测培养基灭菌是否合格的方法是取若干灭菌后未接种的培养基（或空白平板）培养一段时间，观察是否有菌落生长。

（2）用无菌移液管吸取25mL酸奶样品加入盛有225mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀，即可将样品稀释10倍。

（3）涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300的平板” 且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。因此，结合表格数据可推知，只有稀释度为107倍的平板菌落数符合要求，可以作为统计结果，则平板上生长的平均菌落数为(78＋67＋74) ÷3＝73个，样品最初被稀释了10倍，后来又被稀释为107倍，即一共稀释了108倍，因此，样品中每毫升乳酸菌数为73×108 ＝7.3×109。

（4）用稀释涂布平板法测定微生物的数量时，两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落，所以统计的数值往往比实际数目低。