Question

转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原（HbsAg)亚单位疫苗，它采用转基因的方法将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，转入啤酒酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位。转基因酵母的产生过程如图所示。质粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四种限制性酶切割位点,且酶切序列如表所示。请回答：

 

(1)由于HBsAg基因序列已知，因此过程①可通过___________得到大量HBsAg基因，此外也可将其连接在________上，通过大肠杆菌培养扩增。

(2)构建含抗病基因的重组质粒时，应选用限制性核酸内切酶__________(不定项选择）（A.SnaBⅠ B.AvrⅡ C.SacⅠ D.BglⅡ)对含HBsAg基因的DNA和质粒进行切割，切割一个含HBsAg基因的DNA分子需要消耗

_______个水分子。

(3)不同的微生物通常需要不同的培养基进行培养，已知酿酒酵母培养基配方为:酵母提取物10g，蛋白胨20g,葡萄糖20g,定容至1L，加入1.5%琼脂粉制成固体培养基。则其灭菌条件应为（______）

A.高压蒸汽灭菌法，且温度为121℃,压力为1kg/cm²,灭菌15分钟

B.高压蒸汽灭菌法，且温度为95℃,压力为500g/cm²，灭菌30分钟

C.将配好的培养基放在超净台中，打开紫外灯和过滤风，灭菌30分钟

D.在超净台中,打开过滤风，在酒精灯火焰旁用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌

(4)将重组质粒导入酵母菌后，可用________法接种到固体培养基上。某同学在接种后得到如图所示的菌落分布，推测该同学接种时可能的操作失误是__________。若欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入HBsAg基因的酵母菌,则应使重组质粒中含有_______作为标记基因，这种培养基属于__________培养基。

(5)已知酵母菌的最适培养温度是28℃，在培养时可将培养皿倒置并放入__________进行培养。若不倒置培养将导致______________________。

Answer

PCR技术 质粒 B、D 4 B 涂布分离 涂布不均勻 抗卡那霉素基因 选择 恒温培养箱 无法形成单菌落

【解析】试题分析：分析图表，构建基因表达载体时，使用限制酶切割不能破坏启动子也不能破坏抗性基因；为避免质粒和目的基因自身环化，在将HBsAg基因和质粒重组时，应该选择不同的限制酶进行切割基因两侧。

（1）图中过程①获取目的基因的过程，由于HBsAg基因序列已知，可以通过PCR技术扩增获得大量的HBsAg基因，也可以将其连接在质粒上，导入大肠杆菌，通过大肠杆菌培养扩增。

（2）据图分析，目的基因左侧只能用BglⅡ切割，综合目的基因右侧和质粒，另一种限制酶应该是AvrⅡ。切割一个含HBsAg基因的DNA分子破坏了4个磷酸二酯键，所以需要消耗4个水分子。

（3）微生物培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，即温度为121℃,压力为1kg/cm2,灭菌15分钟。

（4）将重组质粒导入酵母菌后，可用涂布分离法接种到固体培养基上。图示的菌落分布不均匀，可能是该同学接种时涂布不均匀导致的。若欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入HBsAg基因的酵母菌,则应使重组质粒中含有抗卡那霉素基因作为标记基因，这种培养基属于选择培养基。

（5）酵母菌培养过程中，可将培养皿倒置并放入恒温培养箱进行培养。若不倒置培养将导致无法形成单菌落。

【点睛】本题结合图表，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、适宜的工具及具体的操作步骤，能结合图中和表中信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查。