Question

某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用_____________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有_______种。

（2）在构建重组质粒时，应选用______酶和________酶，对_______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入________________，理由是_______。

（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用__________________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加________。

Answer

DNA连接酶 3 SalⅠ HindⅢ 质粒和含抗盐基因的DNA 氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏 植物组织培养 细胞增殖和分化 生长素和细胞分裂素

【解析】【试题分析】

解答本题的关键是理解基因工程的操作步骤以及植物组织培养的过程——脱分化和再分化。

1.由于抗四环素基因被限制酶切断而不起作用，故导入了重组质粒的农杆菌能在含氨苄青霉素的培养基上生长，却不能在含四环素的培养基上生长。

2．要将单个的细胞培育成完整的植株需要利用植物组织培养技术，愈伤组织通过细胞分化和细胞增殖发育成完整植株。在植物组织培养过程中植物激素（生长素和细胞分裂素）起着关键性的作用，当生长素与细胞分裂素含量相当时，有利于脱分化，当生长素大于细胞分裂素时，有利于生根，当生长素含量小于细胞分裂素时，有利于生芽。

（1）将DNA片段连接起来用的是DNA连接酶；两个DNA片段的连接存在质粒与质粒连接、质粒与目的基因连接、目的基因与目的基因连接3种连接方式。

（2）根据图中限制酶的识别位点，BamHⅠ会切断目的基因，故应选用SalⅠ和Hind Ⅲ对质粒、含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）由于抗四环素基因被限制酶切断而不起作用，即重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏，所以为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素。

（4）将单个的细胞培育成完整的植株需要利用植物组织培养技术；愈伤组织经细胞增殖和分化进而形成完整植株；此过程除营养物质外还必须向培养基中添加生长素和细胞分裂素。