Question

内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ET_A是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ET_A基因在细胞中高效表达，为后期ET_A的体外研究奠定基础。其过程如图（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为—C↓CCGGG—，限制酶XhoⅠ的识别序列为—C↓TCGAG—）。请分析回答下列问题：

（1）完成过程①需要的酶是_____________。

（2）过程③中，两种限制酶在切割DNA时，将_____________键断开，写出限制酶XhoⅠ切割形成的一个黏性末端_____________________________。

（3）在满足条件的情况下，图过程中③与⑤用两种限制酶分别切割目的基因与质粒，获得不同的黏性末端构建表达载体的方法与用同一种限制酶切割构建表达载体相比，其优点是________________。

（4）过程⑥中，要用_____________预先处理大肠杆菌，使其转变为能够吸收周围环境中DNA分子的___________________________细胞。为了将该过程获得的含重组质粒的大肠杆菌筛选出来，应使用含______________的培养基。

（5）图示过程中将SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，目的是__________________。

Answer

逆转录酶 磷酸二酯 防止目的基因与运载体反向连接、质粒自身环化 Ca2+ 感受态 氨苄青霉素 便于ETA基因的表达及产物的检测

【解析】分析：①、②、③过程表示反转录法获得目的基因的过程，④表示基因表达载体的构建过程，⑤表示利用限制酶切割质粒的过程，⑥表示将重组质粒导入受体细胞的过程，⑦表示目的基因的检测。

（1）图中①是逆转录过程，需要逆转录酶的催化；该酶催化的底物是脱氧核苷酸；

（2）③是利用限制酶切割DNA将DNA的磷酸二酯键断开，获得目的基因的过程，由于限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是；

（3）用两种限制酶分别切割目的基因与质粒，与用同一种限制酶切割构建表达载体相比，其优点是防止目的基因与运载体反向连接、质粒自身环化；

（4）过程⑥中，要用Ca2+预先处理大肠杆菌，使其转变为能够吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。为了将该过程获得的含重组质粒的大肠杆菌筛选出来，由于质粒含有氨苄青霉素抗性基因，所以应使用含氨苄青霉素的培养基；（5）图示过程中将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，可以检测ETA基因能否表达及表达量，便于ETA基因的表达及产物的检测。