Question

科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列相关问题:

（1）在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用       技术対目的基因进行扩增，该技术需要的条件是:        、         、原料和              。

（2）为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的            之后。基因工程核心步骤的名称是                 。

（3）研究人员通常采用               法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用         技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。

Answer

（1）PCR 引物 Taq酶 模板

（2）启动子 基因表达载体的构建

（3）农杆菌转化 抗原-抗体杂交

【解析】（1）在基因工程中，研究人员首先获取目的基因，并采用PCR技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是：引物、酶、原料和模板．

（2）基因工程核心步骤的名称是基因表达载体的构建．为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的启动子之后．

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，即采用农杆菌转化法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内；通常采用抗原-抗体杂交技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质．

【考点定位】基因工程的原理及技术

【名师点睛】基因工程的基本操作程序：

第一步：目的基因的获取

1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因．

2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用的有反转录法和化学合成法．

3、PCR技术扩增目的基因

第二步：基因表达载体的构建

1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用．

2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因

第三步：将目的基因导入受体细胞

1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程．

2、常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等．

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵．

将目的基因导入微生物细胞：其转化方法是Ca2+转化法．

第四步：目的基因的检测和表达

DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术、个体生物学水平的鉴定．