Question

尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________（写一种）。

（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作时，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________。

（3）下面是两种培养基配方：

表1：A培养基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂	H2O
1．4 g	2．1 g	0．2 g	10．0 g	1．0 g	15．0 g	1 000 mL

表2：B培养基配方

纤维素粉	NaNO3	Na2HPO4·7H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母浸膏	H2O
5 g	1 g	1．2 g	0．9 g	0．5 g	0．5 g	0．5 g	1 000 mL

①配制培养基的操作步骤________（用字母顺序回答）。

a．倒平板

b．计算

c．溶化 

d．称量 

e．灭菌

②通常培养基采用____________法灭菌。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述A配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

（4）如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成________。

Answer

（1）平板划线 稀释涂布平板法

（2）灭菌

（3）①bdcea ②高压蒸汽灭菌 ③酚红

（4）变性、复性、延伸 脲酶

【解析】（1）题图中微生物的接种中使用了接种环，且是在固体培养基上接种，其接种方法是平板划线法；除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。

（2）接种环通常用灼烧灭菌法。

（3）①配制培养基的操作步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

②培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述以尿素为唯一氮源的A培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

（4）利用PCR技术扩增DNA的过程中，每次循环复制可分变性、复性好和延伸三步；尿素分解菌能分解尿素的直接原因是尿素分解菌能合成脲酶。

【考点定位】微生物的分离和培养