Question

【加试题】回答下列（一）、（二）小题：

（一）请回答与“固定化酶”实验有关的问题：

（1）—淀粉酶可以通过培养枯草杆菌来生产，       是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用          培养基进行扩大培养。

（2）利用物理或化学的方法将—淀粉酶固定后，成为       且又有酶活性的制剂。若用吸附法固定时，在装柱后需要用         缓慢冲洗，直至流出液不使淀粉-碘混合液发生           为止。

（3）将淀粉溶液以一定流速从反应柱上端滴入，再在下端接取少量流出液进行KI-I₂颜色测试，结果不呈现红色。对此现象的解释错误的是

A．反应柱中没有—淀粉酶被固定

B．流速过快淀粉未被水解

C．接取的流出液是蒸馏水

D．流速过慢淀粉被水解成葡萄糖

（二）欲利用基因工程技术将人胰岛素基因转入到小鼠基因组中，以期利用小鼠生产出人胰岛素，请回答：

（1）若用逆转录的方法获得人胰岛素基因，则需要从人体相应的         细胞中提取mRNA，获得的人胰岛素基因经过相应处理后，再利用显微注射技术将其注入到受体细胞中，下列最不适合作为受体细胞的是

（A．受精卵B．胚胎干细胞C．第一次卵裂形成的细胞D．第三次卵裂形成的细胞）

（2）为获得更多的受体细胞，可先对成年雌鼠注射激素进           处理,将获得的卵母细胞培养成熟，与经          处理的精子结合形成受精卵后再进行后期操作。

（3）导入胰岛素基因的受体细胞还需借助           、           等技术才能成为转基因小鼠。

Answer

（一）（1）单菌落分离 液体（2）不溶于水 10倍体积蒸馏水 褪色 （3）D

（二）（1）胰岛β细胞 B （2）超数排卵获能 （3）胚胎体外培养 胚胎移植

【解析】

试题分析：（一）（1）要筛选高表达量菌株的最简便方法可以用单菌落分离法，要进行扩大培养应在液体培养基中。

（2）利用物理或化学的方法将—淀粉酶固定后，成为不溶于水且又有酶活性的制剂。如果用吸附法固定时，在装柱后需要用10倍体积蒸馏水缓慢冲洗，直至流出液不使淀粉-碘混合液发生褪色为止。

（3）出现红色说明淀粉在固定的淀粉酶作用下被水解，没有出现红色，有可能是反应柱中没有—淀粉酶被固定，A正确。也有可能是流速过快淀粉未被水解，B正确。也有可能接取的流出液是蒸馏水，C正确。如果水解成了葡萄糖应是红色，D错误。

（二）（1）胰岛素的mRNA需要从胰岛B细胞中获取。动物受体细胞最好是受精卵，分化程度越低越好，胚胎干细胞已经是有所分化的细胞，B最不合适。

（2）要获得更多的卵细胞可以用性激素进行超数排卵处理，培养成熟后可以与获能的精子进行体外受精形成受精卵。

（3）将目的基因导入受体细胞后还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术才能发育成真正的个体成为转基因小鼠。

考点：本题考查酶固定化技术和基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。