Question

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因通过       （方法）注入到羊的           中，则发育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及到以下哪些过程（多选）             。

A．DNA自我复制B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

(2)若图2中目的基因D需要同时使用MetⅠ和PstⅠ才能获得，而图1所示的质粒无相应的限制酶酶切位点。所以在该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶酶切位点的思路（选填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA连接酶⑤DNA聚合酶

首先用          处理质粒；然后用            处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用                处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，它可被②识别。

(3)检测筛选是一个重要步骤。图3表示在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种方法与培养方法，以检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有           、           。从筛选结果分析，含目的基因的是        （填编号）菌落中的细菌。

⑷DNA分子中，一条链的两个核苷酸通过              连接。如要检测目的基因是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌解的              ，用相应抗体检测。

Answer

（1）显微注射 受精卵 ABD

（2）①⑤④②

（3）四环素 青霉素 4、6

（4）磷酸二酯键 总蛋白

【解析】（1）基因工程中，一般采取显微注射法将含有目的基因的重组质粒导入受精卵细胞中，然后将该受精卵发育成具有目的基因的个体。在受精卵发育成个体的过程中涉及到细胞分裂和细胞分化，会发生DNA的复制、转录形成RNA，翻译成蛋白质，但是不会发生RNA的复制，故选ABD。

（2）根据题干信息和图像分析，对质粒改造，构建新的限制酶酶切位点时，首先用①EcoRⅠ处理质粒；然后用⑤DNA聚合酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用④DNA连接酶处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，它可被②MetⅠ识别。

（3）培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素和青霉素。从图3筛选结果分析，培养基B中少了4、6菌落，所以含目的基因的是4、6菌落中的细菌。

（4）DNA分子中，一条链的两个核苷酸之间是通过磷酸二酯键连接的。如要检测目的基因是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌解的总蛋白，用相应抗体检测。

【考点定位】基因工程的原理及技术