Question

在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行__________处理。

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是________。

（3）在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是__________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（4）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是__________，据此可筛选出目的菌。

（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物质甲，能生长
B	不生长	添加营养物质乙，能生长
A＋B	能生长	不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的原因是_____________。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是____________。

Answer

（1）稀释

（2）以该除草剂为唯一氮源

（3）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源

（4）氮气 该除草剂

（5）突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供

【解析】（1）稀释可以降低细菌浓度；

（2）该细菌的特点是分解除草剂，故培养基中应以该除草剂为唯一氮源；

（3）培养基中除草剂为唯一氮源，大部分细菌不能利用该氮源；

（4）无透明带的菌落说明没有利用培养基的氮源，该菌落的氮源自能来自空气；有透明带的说明菌落利用了培养基中除草剂；

（5）根据表格分析，突变体A无法合成物质甲，可能缺少合成相关的酶；A和B混合能生长原因可能是突变株A生长需要营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供。

【考点定位】微生物的培养和分离、培养基的营养

【名师点睛】用选择培养基分离微生物的方法

（1）在基础培养基中加入抗性物质。举例：①加高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌；②加青霉素分离酵母菌和细菌。

（2）通过改变培养基的成分。举例：①培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存。②培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。

（3）利用培养基的特定成分。举例：①当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。②当纤维素为唯一碳源时，分离纤维素分解菌。