Question

某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。

（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过_________法灭菌处理的_________（填“固体”或“液体”）培养基中，28 ℃振荡培养。

（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行___ ___处理。之后，将菌液涂布接种于以__________为唯一碳源的固体培养基上，30 ℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈_________状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计___________作为空白对照。

（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是__________，则说明此种菌能够___________。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用___________法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。

Answer

（1）高压蒸汽灭菌 液体

（2）系列稀释（或梯度稀释） 淀粉 倒置 未接种的空白培养基（或“接种等量无菌水的培养基”）

（3）出现透明圈 分泌淀粉酶 平板划线

【解析】（1）培养基一般都用高压蒸汽灭菌法灭菌，因为后面要进行涂布，所以应该用液体培养基来培养。

（2）减小培养液菌体浓度一般用梯度稀释的方法。由于题目要求选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，所以培养基就应只以淀粉为唯一碳源。倒置可以减少培养基受污染，为排除其他因素影响，需要设置未接种的空白的培养基作对照组。

（3）淀粉被水解，培养基会出现透明圈的现象，明此种菌能够分泌淀粉酶使淀粉发生水解。用平板划线法来培养，可进一步纯化菌种。

【考点定位】土壤中能分解纤维素的微生物及其应用价值

【名师点睛】从土壤中分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌，富集培养可以使用液体培养基。选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的。筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌必须使用以淀粉为唯一碳源的选择培养基。