Question

GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是          。

（2）基因工程中最常用的载体是            。构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的     限制酶进行酶切。基因表达载体中必须有启动子、          、             等三部分。

（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第   泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。

（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞的方法是              。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行                培养以得到更多数量的细胞。

（5）科学家使用转基因动物生产药物时通常将药用蛋白基因与             等调控组件重组在一起导入哺乳动物的受精卵中，使转基因动物通过分泌的乳汁来生产药物，此转基因动物被称作             。

Answer

（1）使细胞分散开

（2）质粒 XhoI 终止子 标记基因 目的基因

（3）②

（4）显微注射技术 传代

（5）乳腺蛋白基因的启动子 乳腺生物反应器

【解析】

试题分析：

（1）动物细胞培养时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用，使细胞分散开。

（2）质粒上有XhoⅠ识别位点，而且在启动子之后，所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切。

（3）泳道①仅有一种条带，属于载体自连；泳道②有两种条带，且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同，为正向连接；泳道③有两种条带，长度与BamHⅠ酶切后结果相同，为反向连接。

（4）将目的基因导入动物受体细胞常用的方法是显微注射技术，当细胞密度达到一定程度，需要进行分瓶，进行传代培养。

（5）通常将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起导入哺乳动物的受精卵中，使转基因动物通过分泌的乳汁来生产药物，此转基因动物被称作乳腺生物反应器。

考点：基因工程的原理及应用。