Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。

（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。

（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。

（4）对代孕牛的要求是_________________。

Answer

（1）HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 启动子 显微注射

（2）胚胎移植 双

（3）抗原—抗体杂交

（4）有健康体质和正常繁殖能力

【解析】（1）由图中信息可知，载体上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，目的基因上也有它们的酶切位点，应用此2种酶切．当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tetR基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行，能让目的基因开始表达的是启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度，过程①将目的基因导入到动物中常用显微注射法。

（2）过程②早期胚胎移入代孕牛的体内利用的是胚胎移植的技术，对早期胚胎进行切割，经过程胚胎移植过程可获得多个新个体都发育成了个体，目前最常见的是经分割产生的同卵双胎。

（3）一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法。

（4）对代孕牛的一般要求是有健康的体质以及能正常繁殖后代。

【考点定位】基因工程的原理及技术；胚胎分割移植

【名师点睛】总结胚胎分割的相关知识点：

（1）概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。

（2）意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。

（3）材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚，桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。

（4）操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发展。