Question

在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行____  __处理。

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为__    __体培养基。对培养基进行灭菌，常采用的方法是______________。实验操作者的双手用________消毒。

（3）在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是________________。

（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是__________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（5）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是___________，有透明带菌落利用的氮源主要是____________，据此可筛选出目的菌。

Answer

（1）稀释

（2）固 高压蒸汽灭菌 70%酒精

（3）划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少（每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落）

（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源

（5）氮气 该除草剂

【解析】（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，将浓度高的溶液通过稀释的方法降低浓度。

（2）以筛选与分离为目的微生物培养皿中的培养基属于固体培养基，且是添加以除草剂作唯一氮源的选择培养基．制作培养基时应该在各种成分都溶化后且分装前调整pH．培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌。实验操作者的双手用70%酒精消毒。

（3）平板划线法时，第一次灼烧接种环的目的是杀灭杂菌，在做第二次以及其后的划线操作时总是从上次划线的末端开始划线的目的是 将聚集的菌种逐步稀释分散，从而获得由一个细胞繁殖而来的菌落。

（4）在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长，原因是培养基缺少这些细菌可利用的氮源。

（5）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；而出现透明带说明除草剂被分解，菌落是分解该除草剂的细菌，氮源是该除草剂。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】微生物培养的关键是无菌操作，从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长。