Question

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是    。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有    。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的     。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从下图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取           作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为    或    。

 

（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发    色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用    的方法。

Answer

（1）核移植

（2）发育的全能性

（3）基因表达载体 B和C HindⅢ和PstⅠ EcoRⅠ和PstⅠ

（4）绿 抗原—抗体杂交

【解析】

试题分析：

（1）分析图形可知，图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的流程，其中过程①获得重组胚胎之前需要通过核移植技术获得重组细胞，接受细胞核的去核卵母细胞应该处于MⅡ期；②表示早期胚胎培养过程；③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。

（2）ES细胞可以从囊胚的内细胞团中分离出来，将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有发育的全能性。

（3）采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞前，需要构建含有干扰素基因的基因表达载体（重组质粒）。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，子链和模板链反向平行，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以选取B和C作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，既要防止目的基因或质粒自身连接，又要保证重组质粒中一定含有完整的标记基因，所以可选用限制酶的组合为HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ。

（4）根据上述分析可知，构建的重组质粒中绿色荧光蛋白基因完整，但红色荧光蛋白基因已经被破坏，所以将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用抗体-抗原杂交技术，若有杂交带出现，表明目的基因已成功表达。

考点：本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，意在考查考生能识记核移植技术的过程及应用、识记胚胎干细胞的来源及特点，能从图表中获取有效信息，运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理判断的能力。