Question

(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。

请回答：

(1)进行过程①时，需用　　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　      。

(2)进行过程②时，需用　　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取　　　　　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中　　　　　　(选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。

Answer

 (1)限制性核酸内切(或限制) 启动子 (2)胰蛋白   (3)RNA RAS蛋白

【解析】

试题分析：(1)过程①表示基因工程操作步骤中基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制性核酸内切酶(简称限制酶)对载体进行切割，以便于目的基因的插入；启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。

(2)过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制现象后，可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，随后分装到新的培养瓶中进行传代培养。

(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来检测，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺细胞中的let－7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌”知，导入let－7基因后，肺癌细胞的增殖受到抑制；据图2可知，let－7基因影响RAS基因表达的机理是：let－7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。

考点：本题主要考查学生基因工程、细胞工程的相关知识，意在使学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构。