| 1. 难度：简单 | |
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兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答： （1）从兔肝细胞中提取mRNA，在 酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板在体外利用 反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起， A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织 B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽 C．再生的芽在细胞分 D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株 （2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于 上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是 ，从而使叶片保持正常形态。
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| 2. 难度：困难 | |
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啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答： （1）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入___，发酵生产 转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有 __（A．1 个 B．2 个 C．3个D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为___。该转基因技术实践应用的成功标志是 __。 （2）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与 __融合，得到___，并促使其在体外分裂发育成 __，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是 __。 （3）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为 __，其作用是 __。
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| 3. 难度：中等 | |
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利用未知序列的抗虫基因培育抗害虫的转基因番茄，通常采用________________ A.建立基因文库的方法 B.化学合成方法 C.逆转录法 D.PCR技术 获取抗虫基因，再用相同的限制性核酸内切酶分别作用抗虫基因和Ti质粒，形成________________，然后在DNA连接酶的作用下，形成重组质粒，通过农杆菌导入番茄细胞，进而培育成转基因抗虫番茄。这种利用基因工程和植物克隆技术相结合培育新品种的方法，就是________________技术的应用。
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| 4. 难度：中等 | |
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科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制性核酸内切酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：
（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶 ______ 分别对 ______ 、 ______ 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为 ______ 、 ______ 种。 （2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使I重组DNA中含有 ______ 作为标记基因。 （3）研究人员通常采用 ______ 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
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| 5. 难度：困难 | |
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某小组欲进行基因工程菌的构建与研究。请回答下列问题： （1）获取上述高产谷胱甘肽酵母菌（甲）的DNA，经_____酶处理得到DNA片段后建立_____，从中获取目的基因。 （2）将目的基因与质粒构建成_____，将其导入低产硫化氢的酵母菌（乙）后，经培养获取大量酵母菌，再通过分离纯化培养，根据_____ A．标记基因的表达 B．目的基因的导入 C．硫化氢的含量 D．谷胱甘肽的含量 检测筛选出优良酵母菌。以上过程中的分离纯化培养相当于动物细胞_____培养法。 （3）若要培养转基因植物，还需要用到____________技术，培养过程中主要是通过_____________进行调控。
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| 6. 难度：中等 | |
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我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白），对应的基因为s基因。请回答： （1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理_________， （2）在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有_________现象，需要定期使用_________酶处理，以便于分瓶培养。 （3）为提髙工程细胞培养的成功率，下列措施中不幸采用的是（_____） A.取单个细胞进行培养 B.加入胰岛素 C.二氧化碳培养箱 D.加入动物血清 （4）由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是__________________。
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| 7. 难度：困难 | |
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人血清蛋白（HSA)具有重要的医用价值。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。
(1)如果HSA基因序列未知，可以采用____________的方法获取该目的基因，为了使目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存，通常要先构建_____________后才能导入宿主细胞。 (2)方框中的“？”一般选用的生物是________,为了提高II过程的导入成功率，通常用________处理大肠杆菌。 (3)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性，所以，选择_____途径（填I或II)获取rHSA更有优势。 (4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用_____________方法来进行检验。 A.检验HSA基因是否导入 B.检验细胞中是否产生相应的mRNA C.抗原、抗体杂交 D.检测是否有标记基因
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| 8. 难度：困难 | |
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基因工程基本操作流程如图，请据图分析回答问题。
(1)图中X是__________，在目的基因与载体DNA的两端形成_______后,才能在DNA连接酶的催化下形成X。 (2)在上述基因工程的操作过程中，与碱基互补配对无关的步骤有__________ A.① B.② C.③ D.④ (3)若要培育能生产彩色羊毛的转基因羊，则一般用____________ 做受体细胞。 (4)在培育抗枯萎病的金茶花时，离体金茶花叶组织经_________ 形成愈伤组织,再通过________培养得到单细胞，将外源基因导入其中，经筛选培养形成抗病植株。 该过程中用到的植物细胞工程技术是 ______________ 。 (5)与工程菌扩大培养相比，分离和计数工程菌所用的培养基中还应加入_________制成平板，配置该培养基的基本步骤是___________ A.计算、称量、倒平板、融化、 灭菌 B.计算、称量、融化、倒平板、灭菌 C.计算、称量、融化、灭菌、倒平板 D.计算、称量、灭菌、融化、倒平板 再采用______的方法接种。 (6)对培养基灭菌的方法一般为_______,含尿素的培养基需用___________过滤除去杂菌。
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| 9. 难度：中等 | |
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新一代基因编辑工具由Cas9（一种限制性核酸内切酶）和向导RNA构成。该复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在合适位点切断DNA双链（如下图所示）。DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制，在此基础上如果为细胞提供一个修复模板，细胞就会
请回答： （1）在将编码Cas9的基因导入真核细胞的转基因操作中，若控制合成Cas9的基因序列已知，可用___方法合成目的基因，再构建___导入真核细胞，该过程中需要使用的酶是__ A．限制性核酸内切酶 B．DNA连接酶 C．限制性核酸内切酶和DNA连接酶 D．DNA聚合酶 上述转基因操作成功的标志是__ 。 （2）如图所示，基因编辑工具发挥作用时，向导RNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为___所以能结合在一起，然后由Cas9催化__键断裂，从而使DNA分子断裂。 （3）一般来说，在使用基因编辑工具对不同基因进行编辑时，应使用Cas9和___（填“相同”或“不同”）的向导RNA进行基因的相关编辑。
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