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许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因,其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和I...

许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因,其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-galIPTG存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞,过程如下图。请据图回答:满分5 manfen5.com

1基因工程中,构建基因表达载体的目的是                                             

2限制酶EcoRⅠ的识别序列和切点是—GAATTC—SmaⅠ的识别序列和切点是—CCCGGG—。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前,需在目的基因的右侧连接相应的末端,连接的末端序列是  满分5 manfen5.com         ,连接过程中需要的基本工具是        

3转化过程中,大肠杆菌应先用        处理,使其处于能吸收周围DNA的状态。

4菌落的颜色为白色的是       ,原因是                             

5菌落③中的目的基因是否能表达,可采用的检测办法是                    

 

(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在,能遗传给后代,并表达和发挥作用 (2)-----TTAA DNA连接酶 (3)Ca2+ (4)菌落③ lacZ标记基因区插入外源基因,不能表达出β-半乳糖苷酶,故菌落为白色 (5)抗原—抗体杂交 【解析】 试题分析:(1)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体,目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在,能遗传给后代,并表达和发挥作用。 (2)由图可知,目的基因的左侧有限制酶EcoRI的识别序列,右侧是限制酶SmaI的识别序列,而质粒上只有限制酶EcoRI的识别序列,所以需要用限制酶EcoRI来切割质粒,用限制酶EcoRI和SmaI来切割含有目的基因的外源DNA分子,这样就使目的基因右侧无法与质粒连接,所以目的基因被切割下来和质粒连接之前,需在目的基因的右侧连接限制酶EcoRI切割形成的末端,即-TTAA,连接过程中需要DNA连接酶的催化。 (3)将目的基因导入大肠杆菌细胞之前,应先用Ca2+处理大肠杆菌,使其处于能吸收周围DNA的感受态。 (4)用限制酶EcoRI切割质粒时,会破坏质粒上的lacZ'基因,但切割后的质粒自身环化后,lacZ'基因又被修复,能表达产生B-半乳糖苷酶,在X-gal和IPTG 存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,所以菌落①②呈现蓝色;菌落③导入的是重组质粒,其lacZ'基因被破坏,不能表达产生B-半乳糖苷酶,在X-gal和IPTG存在下,菌落颜色为白色。 (5)检测目的基因是否表达产生蛋白质,可采用抗原一抗体杂交法。 考点:基因工程的原理及其应用  
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考点分析:
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花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病,野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化,并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合,以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

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据图回答下列问题:

1过程①所需的酶是                        

2过程②后,在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的            存在,这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

3原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压,其作用是        。原生质体经过        满分5 manfen5.com      再生,进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

4若分析再生植株的染色体变异类型,应剪取再生植株和                  植株的根尖,通过                           、染色和制片等过程制成装片,然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

5采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增,得到两亲本的差异性条带,可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断,再生植株1—4 中一定是杂种植株的有                    

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6对杂种植株进行                  接种实验,可筛选出具有高抗性的杂种植株。

 

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阅读如下材料:

材料甲:科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在,得到了体型巨大的超级小鼠;科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

材料乙:T4溶菌酶在温度较高时易失去活性,科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造,使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸,在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键,提高了T4溶菌酶的耐热性。

回答下列问题:

1材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用         法。构建基因表达载体常用的工具酶有                  。基因表达载体除了目的基因外,还应包括                                  。在培育转基因植物时,常用农杆菌转化法,农杆菌的作用是                                           

2材料乙属于                   工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础,通过基因修饰或基因合成,对               进行改造,或制造一种                     的技术。在该实例中,引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的        序列发生了改变。

 

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下图为单克隆抗体制备流程示意图。

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1单克隆抗体制备技术的基础是                            

2图中某些淋巴细胞主要来自已免疫小鼠的          。细胞融合是随机的过程,在HAT培养基中培养,目的是                        

3在培养细胞过程中,培养液中需要添加葡萄糖,氨基酸,            ,无机盐,微量元素等营养物质,但要注意无机盐的种类和数量,以保证生命活动的正常进行。

4单克隆抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是                    

5为选育出能产生高特异性抗体的细胞,要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞/mL,每孔滴入01 mL细胞稀释液,其目的是                  

 

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红江橙种植几年后往往容易积累病毒导致品种退化。在生产上可采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗,以保证该品种的品质和产量水平。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的 

A有丝分裂和分化                 B染色体变化和细胞全能性

C减数分裂和配子的形成           DDNA的复制和表达

 

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新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术或仪器与应用匹配正确的是 

APCR技术——扩增蛋白质               B杂交瘤技术——制备单克隆抗体

C光学显微镜——观察叶绿体的基粒      D花粉离体培养——培育多倍体植物

 

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