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酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛(以植...

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛(以植物为食)消化腺中提取;果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果,某实验小组取无菌烟草幼叶,切成相同大小的小片,等量放入6支试管中,试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

试管编号

项目

I

V

蒸馏水(mL)

2

0

1

1

1

1

缓冲液(mL)

0

X

1

05

05

05

果胶酶液(mL)

0

0

0

05

0

0

蜗牛酶液(mL)

0

0

0

0

05

0

纤维素酶液(mL)

0

0

0

0

0

05

实验结果(绿色深浅程度)

+++

++++

++

(注:“+”越多表示绿色越深,“一”表示颜色无显著变化)

实验过程中,需要轻摇试管,其目的是           ,使原生质体从叶小片中游离出来,以便观察悬浮液绿色的深浅。

从绿色的深浅可推测:          酶解效果最好,原因是蜗牛酶液含有        等多种酶。该实验中        是空白对照组,表中X应填     mL

用网筛过滤原生质体到离心管内,离心后收集沉淀物,并用        洗涤。原生质体是否符合要求还需进行检验,其检验的方法是                 

 

(1)为了使细胞壁与酶充分接触,提高酶解效果 (2)蜗牛酶液 果胶酶和纤维素酶 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 2 (3)等渗溶液 低渗涨破法 【解析】 (1)轻摇试管,可使细胞壁与酶充分接触,提高酶解效果 (2)根据表格,V组颜色最深,说明蜗牛酶液酶解效果最好,原因是蜗牛酶液含有果胶酶和纤维素酶,该实验中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ未加任何酶,则为空白对照组,为了排除无关变量,X应填2 mL。 (3)原生质体无细胞壁,用等渗溶液洗涤,可维持细胞的形态,如将原生质体加入到低浓度溶液中,会发生吸水涨破现象,因此可用低渗涨破法来检验原生质体是否符合要求。 【考点定位】关于酶的实验设计 【名师点睛】本题主要考查了学生对酶的实验设计的理解及运用。解决此题的关键是,熟知课本中关于实验变量(自变量、因变量、无关变量)、实验组、对照组的内容。 与酶相关实验的解题技巧 (1)认真审题,准确找出变量,围绕变量设置对照。如: ①探究酶作用的专一性时,应围绕底物或酶制剂设置变量。 ②探究酶作用的高效性时,应围绕无机催化剂和酶制剂这一单一变量设置对照。 ③探究温度(pH)对酶活性的影响时,应设置不同温度(pH)处理进行对照,并确保变量控制的有效性,即应在底物与酶混合之前,先进行同温处理(或先用pH缓冲液调节酶和底物的pH),后混合酶和底物。 (2)设置实验步骤时,应注意: ①根据试题要求,确定单一变量,依据实验变量进行合理分组。 ②根据实验材料,结合实验原理,确定实验现象的观测手段。 ③除单一变量外,确保其他实验条件相同且适宜。 ④合理确定操作程序,确保程序合理、表达准确。  
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