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【加试题】卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用,此外,卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。...

【加试题】卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用,此外,卡那霉素对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因雄性不育基因转入葡萄细胞,利用卡那霉素和头孢霉素,通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答:

1构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因满分5 manfen5.com的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成    以便鉴定是否混有杂菌,再用    将农杆菌转移至LB    培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是       

2将经过    的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上满分5 manfen5.com并接种到固体培满分5 manfen5.com养基中。培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现    和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是  A.抑制葡萄细胞脱分化   B.促进葡萄细胞再分化   C.杀灭农杆菌   D.满分5 manfen5.com促进农杆菌生长

3将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基,待其长出    后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着    作用,植物克隆的技术基础是   

4在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的    基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗。

5最后,对转基因试管苗还需进行逐渐    湿度的锻炼,使之适应自然环境。

 

(1)单菌落 接种环 液体 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 (2)消毒 愈伤 C(2分) (3)丛状苗 筛选 植物组织培养 (4) β―葡糖苷酸酶 (5)降低 【解析】 (1)构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因 的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌,再用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是限制性核酸内切酶 、DNA连接酶。 (2)将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出(此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上) 并接种到固体培 养基中。培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现愈伤和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是杀灭农杆菌。 (3)将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基中,待其长出丛状苗后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着筛选作用,植物克隆的技术基础是植物组织培养。 (4)在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的β―葡糖苷酸酶基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗。 (5)最后,对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼,使之适应自然环境。 【考点定位】微生物培养、基因工程、植物组织培养  
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3在F2中,黑颖有    种基因型,黑颖中纯合子比例   

 

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